Hos vuxna män bildas över 90 procent av testosteron i testiklarna. Det är en speciell typ av celler, kallade Leydigceller, som sköter detta. Binjurarna bidrar också med testosteron, men i mindre mängd. Eftersom binjurarnas produktion av testosteron startar lite tidigare än den i testiklarna, kan pojkar få lite behåring runt könsorganen och i armhålorna redan före puberteten.
I vuxen ålder producerar en man cirka 6-7 mg testosteron per dygn. Den normala nivån av testosteron i blodet ligger mellan 12-35 nmol/l, vilket enkelt går att mäta genom ett vanligt blodprov. Mängden testosteron som produceras varierar under dygnet. Nivåerna kan vara upp till 30 procent högre på morgonen jämfört med nivåerna på kvällen.